吸光光度法測定的是顯色反應(yīng)達到平衡后溶液的吸光度，因此要得到準確的結(jié)果，必須從研究平衡著手，了解影響顯色反應(yīng)的因素，控制適當?shù)臈l件，使顯色反應(yīng)和穩(wěn)定。

1）根據(jù)溶液平衡原理，有色絡(luò)合物的穩(wěn)定常數(shù)越大，顯色劑過量越多，越有利于待測組分形成有色絡(luò)合物。但是過量顯色劑的加入有時會引起副反應(yīng)，對測定反而不利。

2）酸度對顯色反應(yīng)的影響是多方面的。一種金屬離子與某種顯色劑反應(yīng)的適宜酸度范圍是通過實驗來確定的。確定的方法是固定待測組分及顯色劑的濃度，改變?nèi)芤簆H值，測定其吸光度，作出吸光度-pH值關(guān)系曲線，選擇曲線平坦部分對應(yīng)的pH值作為測定條件。

3）顯色反應(yīng)一般在室溫下進行，有的反應(yīng)需要加熱，以加速顯色反應(yīng)，使之進行反應(yīng)。

4）大多數(shù)顯色反應(yīng)需要經(jīng)過一定的時間才能完成，其長短與溫度的高低有關(guān)，也會受到空氣的氧化或發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)使眼色顏色減弱。因此必須通過實驗作出在一定溫度下的吸光度-時間關(guān)系曲線，得到適宜的顯色時間。

分光光度計在使用前，使用者應(yīng)該首先了解該儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。